木腐生菌类：木屑三级菌种制备方法与木屑二级种几乎相同，所不同的仅是在洗涤前菌种瓶的正中央打一锥形孔，孔径2cm。打孔的目的是接种时，菌种能从预留孔落入，便于菌种瓶内培养基表面和空穴内菌丝同步蔓延，缩短培育时间，有利于容器内菌丝的菌龄基本相同。

草腐生菌类：

1.麦粒三级菌种的制作：

1）.浸泡，清洗，去尘土

2）.摊晾、拌料

3）.装瓶

4）.洗瓶，塞棉花

5）.灭菌、冷却

2.稻草段三级菌种的制作：取无霉烂，新鲜的干稻草段切成3-4cm长，浸泡3-5小时后沥干，撒入麸皮，拌入石膏，过磷酸钙，即可装瓶，压瓶，洗涤，塞棉花，立即灭菌。